PakAuto assay
BRUKSANVISNING PakAuto® assay REF PakAuto IVD INNEHÅLLSFÖRTECKNING AVSEDD ANVÄNDNING ............................................................................................................................................... 2 SAMMANFATTNING AV FÖRKLARING ...................................................................................................................... 2 PROCEDURENS PRINCIP ............................................................................................................................................ 2 REAGENS ..................................................................................................................................................................... 2 FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER ...................................................................................................................................... 3 FÖRSIKTIGHET............................................................................................................................................................. 3 PROVTAGNING............................................................................................................................................................. 3 METOD .......................................................................................................................................................................... 4 Material som medföljer ............................................................................................................................................. 4 Ytterligare material som krävs .................................................................................................................................. 4 Testmetod................................................................................................................................................................. 4 KVALITETSKONTROLL ............................................................................................................................................... 7 TOLKNING AV TESTRESULTAT ................................................................................................................................. 8 BEGRÄNSNINGAR ....................................................................................................................................................... 8 SPECIFIKA PRESTANDAEGENSKAPER .................................................................................................................... 8 REFERENSER ............................................................................................................................................................... 8 PakAuto assay 1 303467.IFUSV REV B AVSEDD ANVÄNDNING PakAuto assay är en kvalitativ enzymlänkad immunosorbent analys (ELISA) i fast fas utformad för att trombocytautoantikroppar eluerade från patientens trombocyter eller som cirkulerar i patientens serum eller plasma. detektera SAMMANFATTNING AV FÖRKLARING Autoimmun trombocytopen purpura (AITP) är en av de vanligaste orsakerna till immun trombocytopeni. Ungefär hälften av alla AITP-fall förekommer i samband med andra sjukdomstillstånd som lymfom, systemisk lupus erythematosus (SLE) och HIV-infektion; återstående fall anses vara idiopatiska. På grundval av den kliniska presentationen kan AITP delas in i två typer: akut AITP, en barnsjukdom som vanligtvis är självbegränsande, samt kronisk AITP förekommande hos vuxna och som sällan förbättras spontant. De flesta antikroppar som är associerade med AITP erkänner trombocyt membranglykoproteiner, särskilt GPIIb/IIIa, GPIb/IX, och 1,2 1,2, 3,4,5 GPIa/IIa. Cirkulerande antikroppar reaktiva med dessa mål kan ofta detekteras i plasma eller i serum hos patienter med AITP . Det är emellertid att föredra att karaktärisera trombocyt-associerade immunoglobuliner, framställda från trombocytrik plasma och eluerade från trombocytytan, för att bekräfta autoreaktivitet. Många tester för identifiering av trombocyt-associerade immunoglobuliner 2 saknar specificitet i det att de ofta ger positiva resultat hos patienter med icke-immuna typer av trombocytopeni. PakAuto Solid Phase ELISA-mikrobrunnar innehåller monoklonal-fångade glykoproteiner IIb/IIIa, Ib/IX, och Ia/IIa. Analysen är utformad för att detektera trombocytglykoprotein-specifika autoantikroppar i patientserum eller plasma (cirkulerande antikroppar), eller autoantikropp eluerad från ytan av sina trombocyter. PROCEDURENS PRINCIP Patientens serum eller plasma används för att detektera cirkulerande autoantikropp medan eluat härrörande från trombcytrik plasma används för att detektera autoantikroppar närvarande på ytan av patientens trombocyter. Provet tillsätts i mikrobrunnar belagda med trombocytglykoproteiner som tillåter antikropp, om närvarande, att binda. Obundna antikroppar tvättas sedan bort. En alkalisk fosfatasmärkt antihuman-globulin-reagens (anti-IgG/A/M) tillsätts till brunnarna och inkuberas. Obundet anti-IgG/A/M tvättas bort och substratet PNPP (p-nitrofenylfosfat) tillsätts. Efter en 30-minuters inkubation stoppas reaktionen med stopplösning. Optisk densitet för den färg som utvecklas mäts i en spektrofotometer. REAGENS Maximalt antal tester per sats: PakAuto: 5 tester per sats Alla reagenser ska förvaras enligt anvisningar på etiketten. REF MS TCW SD SB ESS AH CRP 404552 Mikrobrunnsremsor: Flatbottnade mikrobrunnsremsor på vilka trombocytglykoproteiner IIb/IIIa, Ib/IX, och Ia/IIa har immobiliserats. Mikrobrunnarna ligger i en återförslutningsbar foliepåse. Klara att använda. 403622 Koncentrerad tvättlösning (10X): Tris-(hydroximetyl)-aminometanbuffrad lösning innehållande natriumklorid och Tween 20. 1 % natriumazid. Späd med avjoniserat eller destillerat vatten före användning. Förvara bruksfärdig Tvättlösning i upp till 48 timmar i rumstemperatur eller upp till sju dagar vid 2 till 8 °C. 403831 Provspädningsmedel: Fosfatbuffrad saltlösning innehållande bovinalbumin och mus-serum. 0,1% natriumazid. Klar att använda. 403613 Substratbuffert: Denna lösning innehåller dietanolamin och magnesiumklorid. 0,02 % natriumazid. Klar att använda. Skyddas mot ljus. 403603 Stopplösning: Klar att använda. 404588 Antihumant IgG/A/M-Konjugat: Alkaliskt fosfataskonjugerad affinitetsrenad getantikropp immunglobuliner (IgG/A/M). 0,1% natriumazid. Späds i Provspädningsmedel före användning. 404590 Cell-Återsuspension och Konserveringslösning: Fosfatbuffrad saltlösning innehållande EDTA. 0,1% natriumazid. Klar att använda. PakAuto assay 2 mot humana 303467.IFUSV REV B BS ES PN PC NC PCP NCP PS 404560 Buffertlösning: Tris-lösning innehållande bovinalbumin. 0,1% natriumazid. 404565 Elueringslösning: Glycinbuffert med lågt pH. 403594 PNPP-substrat: (p-nitrofenylfosfat) Kristallint pulver. Bereds med avjoniserat eller destillerat vatten och späds i Substratbuffert före användning. Skyddas mot ljus. 404600 Positiv Serumkontroll: Humant serum. 0,1% natriumazid. Späds i Provspädningsmedel före användning. 404576 Negativ Serumkontroll: Humant serum. 0,1% natriumazid. Späds i Provspädningsmedel före användning. 404579 Positiv Trombocytkontroll (Positiv Eluat-Kontroll): Vakuumtorkade humantrombocyter belagda med antikropp. Rehydrera före användning med Cell-Återsuspension och Konserverande Lösning. 404578 Normal Trombocytkontroll (Negaitv Eluat-Kontroll): Vakuumtorkade poolade humantrombocyter. Rehydrera före användning med Cell-Återsuspension och Konserverande Lösning. 503019 Plattförseglare. FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER Använd inte reagenser som är grumliga eller kontaminerade. Försiktighet MÅSTE iakttas för att undvika kontamination av Provspädningsmedel och Konjugat. Oavsiktlig kontamination av dessa reagenser med humant serum eller plasma medför neutralisering av Konjugatet och därefter misslyckat test. Använd inte reagenser efter deras utgångsdatum. De mikrobrunnar och reagenser som ingår i satsen ska inte användas tillsammans med andra testsystem. Byte av komponenter till andra än de som tillhandahålls i denna sats kan leda till inkonsekventa eller felaktiga resultat. Kassera alla oanvända delar av utspätt Konjugat, utspädda Positiva och Negativa Serumkontroller, samt utspätt och berett PNPPreagens efter varje körning. Vid spädningar, följ pipettillverkarens anvisningar för lämpliga dispenserings- och sköljtekniker. Enzymsubstratreaktionen som sker vid den slutliga inkubationen är temperaturkänslig och ska utföras i ett kontrollerat utrymme vid 22 till 25 °C. FÖRSIKTIGHET Allt humant serum som används i de Positiva och Negativa Kontrollerna för denna produkt har testats och befunnits vara negativa för antikroppar mot HIV, HCV och HBsAg med hjälp av FDA-godkända metoder. Ingen testmetod kan dock ge fullständig garanti att det inte finns HIV, hepatit C-virus, hepatit B-virus eller andra smittämnen. Därför ska dessa material hanteras som potentiellt smittsamma. En del av de reagenser som levereras med denna sats innehåller natriumazid som konserveringsmedel. VARNING: Natriumazid reagerar med bly- och kopparrör och bildar högexplosiva metallazider. Om det kastas ut i en vask ska vasken spolas med stora mängder vatten för att förhindra azidackumulering. Natriumazid är ett gift och är giftigt vid förtäring. Kassera alla komponenter enligt lokala föreskrifter när analysen är avslutad. PROVTAGNING Serum eller Trombocytfattig Plasma - för detektering av cirkulerande auto-antikroppar Blod ska samlas in med hjälp av aseptisk teknik i EDTA-antikoagulant eller som serum och testas medan det är färskt. Serum eller trombocytfattig plasma som inte kan testas omedelbart ska förvaras vid 2 till 8 °C i högst 48 timmar eller frysas. Prover som fryses vid -20 °C eller lägre håller sig i gott skick i upp till 2 år. Serum eller plasma bör separeras från röda blodkroppar före transport eller förvaring. Partiklar eller aggregat i proverna kan ge falska positiva resultat eller dåliga kontrollvärden. Prover som innehåller partiklar ska centrifugeras för att avlägsna partiklarna före test. Prover ska delas upp i små volymer om de ska frysas för att undvika upprepade frysnings-/upptiningscykler. PakAuto assay 3 303467.IFUSV REV B Mikrobiellt kontaminerade, hemolyserade, lipemiska, ikteriska eller värmeinaktiverade prover kan ge inkonsekventa testresultat och ska undvikas. Trombocyter eller Trombocytrik Plasma - för detektering av autoantikroppar eluerade från trombocytytor. 8,9 Blod ska samlas in med hjälp aseptisk teknik i EDTA. Förvara helblod eller trombocytrik plasma vid rumstemperatur (20-25 °C). Kyl eller frys inte trombocyter eller trombocytrik plasma. 7 7 För beredning av trombocyt-eluater krävs minst 1 x 10 trombocyter (5 x 10 trombocyter är att föredra). Tillräckligt prov kan erhållas från patienter med trombocytvärden på 10.000/µl genom att samla in två 7 ml-rör helblod. OBS: Transport av blodprov kan resultera i minskade trombocyter. Om prover ska transporteras är det bättre att samla in ett större prov för att säkerställa adekvata trombocyter för eluering. Testa beredda Eluater omedelbart eller förvara frysta vid -80 °C för användning i framtida tester. METOD Material Som Medföljer Flaskorna kan innehålla mer reagens än vad som anges på etiketterna. Se till att mäta upp reagenset med lämplig mätutrustning vid spädning. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 6 – 2 x 8 Mikrobrunnsremsor 1 x 50 ml Koncentrerad Tvättlösning (10X) 1 x 14 ml Provspädningsmedel 1 x 14 ml Substratbuffert 1 x 14 ml Stopplösning 1 x 80 µl Antihumant IgG/A/M-Konjugat 1 x 50 ml Cell-Återsuspension och Konserveringslösning 1 x 2,5 ml Buffertlösning 1 x 2,5 ml Elueringslösning 3 x 50 mg PNPP-Substrat 1 x 0,3 ml Positiv Serumkontroll 1 x 0,7 ml Negativ Serumkontroll 1 Positiv Trombocytkontroll (Positiv Eluat-Kontroll) 1 Normal Trombocytkontroll (Negaitv Eluat-Kontroll) 6 Plattförseglare Ytterligare Material Som Krävs 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. Provrör för patientprov och kontrollspädningar och för reagensspädningar Överföringspipetter Inställningsbara mikropipetter som ger 10 – 100 µl och 100 – 1.000 µl samt engångspipetter Tidur Mikroplattläsare som kan mäta OD vid 405 eller 410 och 490 nm Avjoniserat eller destillerat vatten Absorberande pappershanddukar Mikroplattstvätt eller -apparat för centrifug som kan separera serum eller plasma från patientprover 37 °C vattenbad eller inkubator Mikrocentrifugrör Mikrocentrifug för pelletering av trombocyter 7 Normala trombocyter (5 x 10 ) för elueringskontroll Testmetod 1. Låt alla reagenser uppnå rumstemperatur på 22-25 °C. 2. Gör Bruksfärdig Tvättlösning genom att späda Koncentrerad Tvättlösning. Tillsätt 1 del Koncentrerad Tvättlösning till 9 delar avjoniserat eller destillerat vatten. Blanda väl. 3. Beräkna antalet patientprover (eluat eller serum/plasma) som ska testas. Använd Registreringsbladet och tilldela varje prov en plats bestående av en kolumn. Registrera varje provs identitet på Registreringsbladet. PakAuto assay 4 303467.IFUSV REV B Bereda Provtrombocyter 4. Bered trombocytpellets från patient- eller normala donatortrombocyter enligt följande: a) b) c) d) e) Bered trombocytrik plasma (PRP) genom att centrifugera EDTA-blodprov vid 110-150 rcf under 10 - 15 minuter. Överför PRP till ett rent polypropylen-provrör och centrifugera vid 10.600 rcf i 5-10 minuter för att få en trombocytknapp. Avlägsna plasma utan att störa trombocytknappen med hjälp av en överförings pipett. Tillsätt 500 µl Cell-Återsuspension och Konserverande Lösning (CRP) till trombocytpelleten och blanda väl med en överföringspipett så att pelleten sönderdelas helt. Överför trombocytsuspensionen till ett mikrofugrör och tvätta tre gånger enligt beskrivning ovan med minst 500 µl cell-återsuspension och konserverande lösning. Försäkra att trombocytknappen helt har återsuspenderats i varje tvättning för att tillåta avlägsnande av plasma från trombocytytorna. 7 Efter den sista tvätten bereds en trombocytpellet innehållande mellan 1 och 5 x 10 trombocyter. Detta kan göras genom att återsuspendera trombocyterna med cell-återsuspension och konserverande lösning och justera trombocytantalet till 10.00050.000 trombocyter per µl. Överför 1 ml till ett mikrofugrör och centrifugera under 5 min vid 10.600 rcf för att pelletera. (Alternativt ska en 5-10 µl pellet av trombocyter innehålla tillräckligt med trombocyter för att utföra eluering. Jämför pelleten med ett identiskt rör innehållande 5-10 µlprovspädningsmedel.) Efter pelletting av trombocytknappen avlägsnas fullständigt eventuella rester av cell-återsuspension och konserverande lösning med hjälp av en överförings pipett. Sönderdela inte trombocytknappen. Bereda Kontrolltrombocyter 5. Bered kontrolltrombocytpellets enligt följande: Tillsätt 500 µl Cell-Återsuspension och Konserverande Lösning till den Positiva Trombocytkontrollen (Positiv Eluat-Kontroll) och, vid behov, den Normala Trombocytkontrollen (Negativ Eluat-Kontroll). Låt stå vid rumstemperatur under minst 10 minuter för att rehydrera. Blanda väl med en överföringspipett så att pelletsen sönderdelas helt för att återsuspendera. Centrifugera vid 10.600 rcf i 5-10 minuter. Dekantera eller aspirera supernatanten och torka bort återstående buffert för att få en torr knapp med trombocyter. OBS: Det är bättre att använda färska normala trombocyter för Negativ Eluat-Kontroll, men en torkad trombocyt medföljer för tillfällen då normala trombocyter inte finns tillgängliga. OBS: Den Positiva Eluat-Kontrollen kan frysas för framtida användning. Frys eller tina inte beredd Positiv Eluat-Kontroll mer än två gånger. Bereda Prov och Kontroll-Eluater 6. Bered Prov och Kontroll-Eluater enligt följande: a) b) c) 7. Se till att alla trombocytpellets är välsedimenterade och att all återstående cell-återsuspension och konserverande lösning avlägsnats innan du fortsätter. Det är absolut nödvändigt att ta bort alla rester av cell-återsuspension och konserverande lösning för att säkerställa att eluatet, när det bereds, inte späds ut. Tillsätt 180 µl Elueringslösning till varje trombocytknapp och blanda med hjälp av en pipett. Låt blandningen stå i rumstemperatur under 2 minuter. Centrifugera vid 10.600 rcf i 5-10 minuter i ett mikrofugrör. Överför omedelbart supernatanterna (eluaten) till ett rent mikrofugrör och tillsätt 180 µl Buffertlösning i varje rör. Blanda väl. Centrifugera vid 10.600 rcf i 10 minuter i ett mikrofugrör för att avlägsna eventuellt trombocytdebris. När eluaten bereds ska man testa omedelbart för att undvika att antikropp fäster igen på trombocytdebris eller frysa för framtida tester. Trombocyteluater kan förvaras frysta vid -80 °C för användning i framtida tester. Fortsätt till steg 9 om endast eluat ska testas. OBS: Späd inte eluaten. Testa Serum/Plasma för Cirkulerande Antikropp Bereda prover och kontroller 8. 9. Späd enligt följande och blanda väl: Volym Provspädningsmedel Volym Prov PC 150 µL 50 µL NC 300 µL 100 µL Patientserum eller plasma 300 µL 100 µL Ta ut mikrobrunnen från påsen. Ta snabbt ut och återförslut remsor som inte behövs i skyddspåsen. PakAuto assay 5 303467.IFUSV REV B OBS: Endast en ram medföljer satsen. Kasseras inte förrän alla remsor har använts. OBS: Orientera ramen med A1 i övre vänstra hörnet. Se till att alla remsor sitter ordentligt och har knäppts fast i sin ram. Märk eller numrera varje remsa för att undvika fel. Behåll samma plattorientering under hela analysen. 10. Tillsätt 300 µl Bruksfärdig Tvättlösning i alla brunnar och låt stå i rumstemperatur i 5-10 minuter. 11. Aspirera eller dekantera kraftfullt och vänd upp och ned på absorberande handduk för att förhindra torkning. 12. Tillsätt 50 µl av lämpligt eluat, utspädd kontroll eller utspätt patientserum/-plasma i brunnarna i en kolumn enligt bild 1. OBS: Tillsätt inte prover eller reagenser i blankbrunnar. OBS: Om flera patientprover testas samtidigt behövs endast en uppsättning kontroller. MÄRK VARJE REMSA FÖR ATT UNDVIKA FEL. 13. Försegla mikrobrunnarna med en plattförseglare och inkubera i 30-35 minuter i vattenbad på 37 °C. Om en torr inkubator används istället, ökas tiden med 10 minuter. 14. Späd Konjugat 1 till 100 i Provspädningsmedel. Använd en polypropylenbehållare. Remsor AH 2-2x8 20 µl 6-2x8 60 µl SD 2,0 ml 6,0 ml OBS: Konjugatet är visköst. Fyll spetsen 2-3 gånger med Konjugat före dispensering och skölj efter tillsättning till Provspädningsmedel. Blanda väl. 15. TVÄTTSTEG a) b) c) d) e) OBS: Aspirera eller dekantera innehållet i varje brunn och sug upp på absorberande handduk. Tillsätt 300 µl Bruksfärdig Tvättlösning. Aspirera eller dekantera. Upprepa steg b + c för totalt 3 eller 4 tvättar. Dekantera kraftigt efter den slutliga tvätten för att avlägsna all resterande tvättlösning. Vänd upp och ned på absorberande handduk för att förhindra torkning. Det är viktigt att helt avlägsna all tvättlösning efter den sista tvätten. 16. Tillsätt 50 µl utspätt Konjugat (gjort i ett tidigare steg) i alla brunnar UTOM de som utgör BLANKAR. 17. Försegla mikrobrunnarna med en plattförseglare och inkubera i 30-35 minuter i vattenbad på 37 °C. Om en torr inkubator används istället, ökas tiden med 10 minuter. 18. Lös PNPP-substratet genom att tillsätta 0,5 ml avjoniserat eller destillerat vatten i flaskan. Sätt tillbaka proppen och blanda väl. Skyddas mot ljus tills det ska användas. 19. Späd PNPP 1 till 100 i substratbuffert. PakAuto assay 6 303467.IFUSV REV B Remsor 2-2x8 6-2x8 PN 40 µl 120 µl SB 4,0 ml 12,0 ml Blanda väl. Skyddas mot ljus tills det ska användas. 20. TVÄTTSTEG a) b) c) d) e) Aspirera eller dekantera innehållet i varje brunn och sug upp på absorberande handduk. Tillsätt 300 µl Bruksfärdig Tvättlösning. Aspirera eller dekantera. Upprepa steg b + c för totalt 3 eller 4 tvättar. Dekantera kraftigt efter den slutliga tvätten för att avlägsna all resterande tvättlösning. Vänd upp och ned på absorberande handduk för att förhindra torkning. Fortsätt omgående med följande tre steg. 21. Tillsätt 100 µl av den utspädda PNPP-lösningen i alla brunnar UTOM de som utgör BLANKAR. 22. Låt mikrobrunnarna stå i mörker i 30 minuter vid RUMSTEMPERATUR (22-25 °C). OBS: Inkubationstiden och temperaturen efter tillsatsen av PNPP är kritisk. Ändra INTE fastställd inkubationstid eller temperatur. För konsekvensens skull, börja tidtagningen efter tillsats av reagens i första brunnen. 23. Stoppa reaktionen genom att tillsätta 100 µl Stopplösning till varje brunn i samma ordning som vid tillsats av substrat. Tillsätt 200 µl stopplösning till blankbrunnarna. 24. Läs av absorbansen (OD) för varje brunn vid 405 eller 410 nm genom att använda ett referensfilter på 490 nm. Om resultaten inte kan avläsas genast, sätt tillbaka brunnarna i ett mörkt utrymme i upp till 30 minuter. 25. Subtrahera de värden som erhålls i blankbrunnarna från alla prov- och kontrollbrunnar. Många ELISA-läsare är programmerade att automatiskt utföra detta steg. 26. Registrera resultaten på registreringsbladet. KVALITETSKONTROLL Kvalitetskontroll i PakAuto assay är inbyggd i testsystemet genom att inkludera Positiva och Negativa Kontroller. Använd Positiv Serumkontroll och Negativ Serumkontroll vid testning av enbart patientserum/-plasma. Inkludera Positiv Trombocytkontroll och Normal trombocytkontroll vid testning av patientens eluat-prover. Dessa kontroller ska inkluderas i varje test som körs för att hjälpa till att fastställa om tekniska fel eller reagensfel har inträffat. Kriterier för ett giltigt test: Negativ Kontroll Positiv Kontroll Eluat 0,100 (IIb/IIIa rad) 1,000 Serum 0,160 (IIb/IIIa rad) 1,000 OD-avläsningar som erhålls för dubbeltestresultat ska ligga inom 20 % av medelvärdet av de två värdena. Prover vars resultat ligger utanför denna gräns ska testas på nytt. OBS: Dåliga dublettresultat kan vara en följd av utelämnat reagens eller prov, ojämn tillsats av reagenser, ojämn temperatur under inkubationer, läckljus under den slutliga inkubationen eller korskontamination mellan brunnar. Underlåtenhet att dubbeltesta kan leda till att felaktiga resultat godtas. TOLKNING AV TESTRESULTAT Testresultat som visar OD-värden som är lika höga eller högre än 2 gånger det värde som erhölls för genomsnittet av de negativa kontrollerna för motsvarande glykoprotein (2 negativa kontrollvärden för varje glykoprotein) betraktas som positiva resultat. PakAuto assay 7 303467.IFUSV REV B BEGRÄNSNINGAR Felaktiga resultat kan uppstå på grund av bakteriekontamination av testmaterial, otillräckliga inkubationstider, otillräcklig tvättning eller dekantering av testbrunnar, exponering av substrat för läckljus, överhoppade testreagenser, exponering för högre eller lägre temperaturer än föreskrivet, otillräckliga eller alltför stora trombocyter, eller överhoppade steg. Förekomst av immunkomplex eller andra immunglobulinaggregat i patientprovet kan orsaka ökad ospecifik bindning och ge falskt positiva resultat i denna analys. Vissa antikroppar med låg titer och låg aviditet kan inte detekteras med denna analys. Resultaten av denna analys ska inte användas som enda grund för ett kliniskt beslut. Produkten är särskilt utformad för att upptäcka autoantikroppar eluerade från patientens trombocyter. En positiv reaktion erhållen enbart med patientserum eller -plasma indikerar därför inte nödvändigtvis närvaron av en autoantikropp. Trombocytspecifika alloantikroppar kan också vara reaktiva med denna analys. PakAuto assay är utformad för att detektera autoantikroppar reaktiva med trombocytglykoproteiner IIb/IIIa, Ib/IX och Ia/IIa. Autoantikroppar mot andra trombocytaggregationshämmande proteiner förväntas inte reagera i denna analys. Det är möjligt att en autoantikropp kan ge falskt negativt resultat i denna analys på grund av steriskt hinder av de humana autoantikropparna med de murina monoklonala antikropparna som används för att fånga in trombocytglykoprotein. PakAuto är avsett att användas som ett screeningtest. De reaktionsmönster som ett testprov producerar med denna produkt ska inte ensamt åberopasför att fastställa identiteten hos en trombocytantikropp. Därför ska positiva eller negativa resultat som erhålls med användning av denna analys användas i kombination med kliniska fynd eller andra serologiska tester. SPECIFIKA PRESTANDAEGENSKAPER Vid rätt förvaring och användning i enlighet med ovan beskrivna metoder kan denna produkt detektera autoantikroppar mot trombocytglykoproteiner som anges på registreringsbladet. För att säkerställa lämplig reaktivitet och specificitet testas varje parti av PakAuto assay innan det släpps ut med prover som man vet innehåller antikroppar som reagerar med glykoproteiner identifierade på det medföljande registreringsbladet, samt prover som man vet saknar sådana antikroppar. Utvärdering av Prestanda Jämförande Metod Positiv Negativ PakAuto assay Totalt Positiv 24 1 25 Negativ 23 49 72 Totalt 47 50 97 Överensstämmelse: Sampositivitet: Samnegativitet: Jämförande metod: 75,3 % 51,1 % 98 % Trombocytassocierad IgG* (flödescytometri) 6,7 *PAIgG har ett lågt positivt prediktivt värde för ITP. REFERENSER 1. 2. George JN, El-Harake MA, Raskob GE: N. Engl J. Med 331:1207, 1994. George JN, El-Harake MA, Aster RH: Thrombocytopenia due to enhanced platelet destruction by immunologic mechanisms. I Williams Hematology, E Boytler, et al., eds, 5th ed, McGraw-Hill, 1995, p 1315. 3. Bussel JP, Schreiber AD: Immune thrombocytopenic purpura. I Hematology: Basic Principles and Practice, R. Hoffman, et al., eds, Churchill Livingstone, Inc., New York, 1991, p 1485. 4. McMillan R, Imback PA: Immune thrombocytopenic purpura. I Thrombosis and Hemorrhage, J. Loscalzo and Al Schafer, eds, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1994, p 575. 5. Aster RH: The immunologic thrombocytopenias. I Platelet Immunology, TJ Kunicki, JN George, eds, Lipincott, Philadelphia, 1989, p 387. 6. Kelton JG, Powers PJ, Carter CJ: A Prospective Study of the Usefulness of the Measurement of Platelet-Associated IgG for the Diagnosis of Ideopathic Thrombocytopenia Purpura. Blood 1982; 60 No.4: 1050. 7. McMillan R, et.al. Platelet associated and Plasma Anti-Glycoprotein Autoantibodies in Chronic ITP. Blood, 1987; 70 No.4: 1040. 8. American Association of Blood Banks, Blood FAQ, www.aabb.org/resources/bct/Pages/bloodfaq.aspx, September 12, 2013. 9. Canadian Blood Services, Clinical Guide to Transfusion 2. Blood Components: www.transfusion medicine.ca, March 2013. 10. Roback, John D., Combs, Martha Rae, Grossman, Brenda J., Hillyer, Christopher D., Technical Manual AABB, Sixteenth Edition, 2008. PakAuto assay 8 303467.IFUSV REV B Immucor GTI Diagnostics, Inc. 20925 Crossroads Circle Waukesha, WI 53186-4054 USA EC REP Immucor Medizinische Diagnostik GmbH Adam-Opel-Strasse 26A Rodermark 63322 Germany USA och internationell kontaktinformation: Teknisk support: waukeshatechsupport@immucor.com www.immucor.com US-patent nr 5.514.557 © 1996-2015 Immucor GTI Diagnostics, Inc. 303467.IFUSV Rev B 2015-05-15 Warning Danger H302 H318 H412 EUH032 P264 P270 P273 P280 P301 + P312 P305 + P351 + P338 P310 P330 PakAuto assay Varning Fara Skadligt vid förtäring Orsakar allvarliga ögonskador Skadliga långtidseffekter för vattenlevande organismer Utvecklar mycket giftig gas vid kontakt med syra Tvätta … grundligt efter användning Ät inte, drick inte och rök inte när du använder produkten Undvik utsläpp till miljön Använd skyddshandskar/skyddskläder/ögonskydd/ansiktsskydd VID FÖRTÄRING: vid obehag, kontakta GIFTINFORMATIONSCENTRALEN/läkare VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter. Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja Kontakta genast GIFTINFORMATIONSCENTRALEN/läkare Skölj munnen 9 303467.IFUSV REV B
© Copyright 2024