Kvalitetskontroll_AFA kurs 2015_IHL_17.11.2015_2
Kvalitetskontroll av resistensbestemmelse Iren Høyland Löhr Avd. for medisinsk mikrobiologi, Stavanger Universitetssjukehus AFA-kurs, november 2015 Disposisjon EUCASTs lappediffusjonsmetode Resistensbestemmelse og faktorer som påvirker resultatet (kontrollstasjoner) Kvalitetskontroll EUCASTs lappediffusjonsmetode EUCAST: ◦ ◦ ◦ ◦ Disk diffusion – Manual v. 5.0 Disk diffusion – Slide Show v. 5.0 Disk diffusion – Reading guide v. 4.0 QC table v. 5.0 NordicAST: ◦ Metodbeskrivning – bildspel v. 5.0 ◦ Avläsningsguide v. 4.0 AFA: ◦ «Resistensbestemmelse av bakterier. Metodebeskrivelse» ◦ «Kvalitetskontroll av reistensbestemmelse av bakterier» www.eucast.org www.nordicast.org www.unn.no/afa/ Faktorer som påvirker resultatet av resistensbestemmelsen (kontrollstasjoner) Medium Antibiotikadepot (lapper og gradienttester) Praktisk gjennomføring: ◦ Inokulum ◦ Applikasjon av lapper ◦ Inkubering Avlesning Medium (I) Mueller Hinton (MH) Mueller Hinton Fastidious (MH-F) ◦ 5% defibrinert hesteblod; 20 mg/L β-NAD pH: 7,2 – 7,4 ◦ Lav pH kan gi både for små og for store soner Agardybde: 4 ± 0,5 mm Medium (II) Divalente kationer (Ca2+, Mg2+) ◦ For høye nivåer gir små soner (f. eks. aminoglykosider) Thymin og thymidin ◦ For høye nivåer gir små soner (f. eks. trimetoprim og sulfa) Forurensning? Oppbevaring / holdbarhet (8-10°C; en uke…) Antibiotikadepot Oppbevaring av antibiotikadepoter (= lapper og gradienttester) ◦ Følg produsentens anvisninger nøye ◦ Obs: lys, temperatur, fuktighet og holdbarhetsdato Både antibiotikadepoter og medier skal ha værelsestemperatur når de brukes Inokulum (I) Standardisert inokulum: 0,5 McFarland Konfluerende og jevn vekst ◦ Tykkelse på inokulum og bløt/tørr pensel påvirker sonediameter mest! Inokulum (II) E. coli – riktig S. aureus - riktig H. influenzae - riktig E. coli – for tynn S. aureus – feil teknikk H. influenzae – feil teknikk og for tynn Applikasjon av lapper og inkubering 15-15-15 minutters regelen Max 6 lapper på en vanlig skål (90 mm) Skålene inkuberes med bunnen opp ved 35±1oC i 16-20 timer ◦ MH-F i atmosfære med 5±1% CO2 3-4 skåler i en stabel… Avlesning Avlesning ved full hemningssone 100% Avles mot mørk bakgrunn og med påfallende lys (ca. 30 cm avstand) ◦ MH: fra baksiden ◦ MH-F: fra forsiden (uten lokk) Bruk linjal, skyvelær eller automatisk sonemåler Avlesning – unntak Bakterie Antibiotika Avlesning Proteus spp. Alle Overse sverming. Streptococcus spp. Alle Avles vekstsone, ikke βhemolyse (det er ofte vekst i områder med αhemolyse). Alle bakterier Trimetoprim, trimetoprimsulfamethoxazol Mål den indre sonen ved tydelig dobbelsone, men overse svak vekst i den indre hemningsonen. Stenotrophomonas maltophilia Trimetoprimsulfamethoxazol Se bort fra innvekst og mål den ytre sonen Enterococcus spp. Vancomycin Hold skålen opp mot lyset og undersøk sonen. Utydelig sonekant og enkeltkolonier i sonen indikerer vancomycin resistens. Bakterie Antibiotika Avlesning Enterobacteriaceae Ampicillin Overse svak vekst som kan opptre som en indre sone. E. coli Mecillinam Overse enkeltkolonier inne i sonen. S. aureus Bensylpenicillin Hold skålen opp mot lyset og undersøk sonekanten. Dersom sonekanten er skarp (og ≥26 mm), rapporter som R. Staphylococcus spp. Linezolid Hold skålen opp mot lyset og undersøk sonen. Staphylococcus spp. Cefoxitin Undersøk sonen nøye for å detektere evt. kolonier inne i sonen. www.eucast.org www.nordicast.org Avlesning – unntak (bilder) For eksempler vist på kurset se: www.nordicast.org ◦ Metodbeskrivning – bildspel v. 5.0 ◦ Avläsningsguide v. 4.0 Kvalitetskontroll Standardprogram ◦ Kontroll av medium ◦ Kontroll av nøyaktighet og presisjon ◦ Kontroll av evne til å påvise spesifikke resistensmekanismer Utvidet program http://www.eucast.org/ast_of_bacteria/ http://www.nordicast.org/kvalitetskontroll http://www.unn.no/kvalitetskontroll/category19026.html Standardprogram Kontroll av medium (medieproduksjon) ◦ Forurensning, vannkvalitet, autoklavering, pH, agartykkelse, innhold av divalente kationer, thymin og thymidin etc. Kontroll av nøyaktighet og presisjon ◦ Praktisk utføring av resistensbestemmelse og avlesning ◦ Referansestammer testes daglig mot et representativt utvalg av antibiotika (target/range finnes i QC-tabellen) Kontroll av evne til å påvise spesifikke resistensmekanismer ◦ Referansestammer med aktuelle mekanismer (MRSA, VRE, ESBL, BLNAR…) testes mot relevante antibiotika Referansestammer - standard Mikrobe Referansestamme Egenskaper E. coli ATCC 25922; NCTC 12241; CIP 7624; DSM1103; CCUG 17620; CECT 434 Følsom villtype E. coli ATCC 35218; NCTC 11954; CIP 102181; DSM 5923; CCUG 30600; CECT 943 TEM-1 β-lactamase produserende (ampicillin resistent) P. aeruginosa ATCC 27853; NCTC 12903; CIP 76110; DSM 1117; CCUG 17619; CECT 108 Følsom villtype S. aureus ATCC 29213; NCTC 12973; CIP 103429; DSM 2569; CCUG 15915; CECT 794 Svakt β-lactamase produserende E. faecalis ATCC 29212; NCTC 12697; CIP 103214; DSM 2570; CCUG 9997; CECT 795 Følsom villtype S. pneumoniae ATCC 49619; NCTC 12977; CIP 104340; DSM 11967; CCUG 33638 Nedsatt følsomhet for bensylpenicillin H. influenzae ATCC 49766; NCTC 12975; CIP 103570; DSM 11970; CCUG 29539 Følsom villtype Campylobacter jejuni ATCC 33560; NCTC 11351; CIP 702; DSM 4688; CCUG 11284 Følsom villtype http://www.eucast.org/ast_of_bacteria/qc_tables/ Referansestammer - spesifikke resistensmekanismer Mikrobe Referansestamme Egenskaper K. pneumoniae ATCC 700603; NCTC 13368; CCUG 45421; CECT 7787 NCTC 12493 ESBLA produserende (SHV-18) H. influenzae ATCC 49247; NCTC 12699; CIP 104604; DSM 9999; CCUG 26214 β-lactamase negativ, ampicillin resistent (BLNAR) E. faecalis ATCC 51299; NCTC 13379; CIP 104676; DSM 12956; CCUG 34289 Høygradig aminoglycosid resistent (HLAR) og vankomycin resistent (VRE); vanB positiv; vankomycin MIC 8-16 mg/L S. aureus Meticillin heteroresistent (MRSA); mecA positiv http://www.eucast.org/ast_of_bacteria/qc_tables/ Referansestammer En referansestamme er genetisk stabil og skal ha en MIC-verdi som ligger innenfor det konsentrasjonsområdet som er aktuelt ved bruk av disk diffusjonsmetoden Leverandører ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ATCC: American Type Culture Collection NCTC: National Collection of Type Cultures CCUG: The Culture Collection University of Gothenburg CIP: Collection de Institut Pasteur DSMZ: Deutche Stammensammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen ◦ CECT: Colection Espanola de Cultivos Tipo Referansestammer krever spesiell pleie og oppbevaring Utvidet program 50-100 kliniske isolater testes fortløpende en gang i året mot spesifikke antibiotika Medianverdien av sonediameter skal ikke avvike mer enn ± 2 mm fra EUCASTs medianverdi http://www.eucast.org/mic_distributions_and_ecoffs/ Ampicillin / E. coli http://www.eucast.org/mic_distributions_and_ecoffs/ Cefotaxime / K. pneumoniae http://www.eucast.org/mic_distributions_and_ecoffs/ Takk for oppmerksomheten!
© Copyright 2025